大自血疗法 安全篇3——对血浆、内皮细胞的影响

导语

三氧大自血疗法作为一种剂量可控的生物氧化疗法或顺势疗法，在传统治疗基础上以一种重要的补充治疗方式应用于临床，取得了一定的效果。体外全血中加入三氧，血液三氧化后对血浆、内皮细胞的影响给予回顾。

血管中存在有Ｏ3？

研究发现在动脉血管中存在有Ｏ3的证据。[73]活性氧与几种人类疾病相关的观点已经得到广泛的认可[74-78]。活性氧形成物的增加，对疾病进程是初始作用还是一种简单地导致疾病进展的现象还没有定论。

氧化应激无反应性

在丙型肝炎病毒（HCV）或者人类免疫缺陷病毒（HIV）引起的病毒感染过程中，从病毒污染开始到感染的建立之后，为了有利于自身，病毒改变了细胞环境并且通过多种机制诱导抗氧化和氧化偏向后者的不平衡，形成持续性氧化应激[79]。氧化应激在衰老的过程中也存在，虽然变化比较温和但确实是一个持续的过程。

这种慢性过程诱发了对于逆转这种状态的一种无反应性。

[73]Wentworth,P.Jr.,J.Nieva,C.Takeuchi,R.Galve,A.D.Wentworth,R.B.Dilley,G.A.Delaria,A.Saven,B.M.Ba bior,K.D.Janda,A.E schenmoser&R.A.　Lerner,2003,Evidencef or ozone formation in humana therosclerotic arteries. Science, 302: 1053-1056.

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衰老的自由基理论

Harman（1956）提出了衰老的自由基理论。此理论假定活性氧不断破坏脂类、蛋白质和DNA。氧化应激一旦开始直到死亡的过程中一直进行着。这是所有这些疾病的共同特征，这一点已经被证实[74,76,78,80-88]。

[74] Halliwell,B.,Gutteridge J,M,C.,and Cross C.E., 1992,Free radical, antioxidants, and human disease: where are we now?, J.Lab.Clin,Med.119:598-620.      

[76] Ames,B.N., shigenaga M.K., and Hagen.M.,1993,Oxidant,antioxidants, and the degenerative diseases of aging, Proc.Nat.Acad.Sci.USA 90:7915-7922.    

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抗氧化剂能否逆转氧化应激无反应性过程

可能有一些自发的缓解或静止阶段，并且施予抗氧化剂（既然它们是无害的）可能得以改善或者延缓氧化应激，但却不能逆转此过程。

间歇的三氧自体血液治疗呈现诱导抗氧化酶的上调

间歇的三氧自体血液治疗方案呈现诱导抗氧化酶的上调，这些抗氧化酶与抗氧化剂的使用相比，同是逆转慢性氧化应激的一种可能途径，这是一种可计算的、瞬时的、体外发生的氧化应激，这种“小剂量和重复氧化应激之后的多种治疗性应答”或者简称为治疗性“休克”；治疗性“休克”具有其独特的药代动力学特征：三氧血液的回输只涉及活性氧的瞬时脉冲，这些活性氧脉冲能够产生与恒定的活性氧水平不同的刺激。“治疗反应”是通过来自血浆的活性氧（ROS）和脂类氧化产物（LOPS）产生的。

[4] Bocci V., 2002. Oxygen–ozone Therapy. A Critical Evaluation. Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, The NT.

三氧自体血液治疗（O3-AHT）的三氧毒性的控制

用于三氧自体血液治疗（O3-AHT）的三氧毒性能够被很好地控制；三氧浓度在20 -80μg/ml范围内，三氧的总剂量范围4.5 - 18mg也在控制之中；在精确的控制之下于体外发生的，不增加细胞内部发生的慢性氧化应激（COS），在治疗性“休克”中产生的活性氧不可能达到破坏白细胞DNA。[4]这种治疗反应是无毒的，真正的“治疗性休克”能够恢复动态平衡。[14]

[4] Bocci V., 2002. Oxygen–ozone Therapy. A Critical Evaluation. Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, The NT.

[14] Bocci V., Scientific and medical aspects of ozone therapy. State of the art. Arch. Med. Res. 2006 May;37(4):425-435. Review.

三氧加入血液的产物及效用

气体体积和血液体积（通常的比例是1：1）以及准确合适浓度（μg/ml）的臭氧一次性加入到封闭的玻璃容器血液中，当血液在气相-液相界面暴露于O2+O3混合气体中时，两种气体都溶解入血浆中；臭氧立刻与无数的有机分子发生反应，大量的臭氧一定被亲水性的抗氧化物迅速中和而除去；在这一过程中形成了各种各样的新的化合物（臭氧化物、H2O2、氢过氧化物、自由基和醛类）。

为了避免有害的浓度梯度形成，血液的臭氧化必须连续地进行，并轻柔的混合以避免泡沫产生至少5分钟。[4]

合适体积和浓度对血液成分的不带有任何毒性的同质性刺激，在15-20分钟时间内被迅速回输入供者体内的臭氧化血液，还含有各种各样的、来自多不饱和脂肪酸的脂质过氧化产物[89-93]。

这些产物经稀释，与受体结合、代谢和排泄，未显示任何毒性。而且，这些痕量物质到达所有的器官，充当代理信使触发多种形式的生物活性。

三氧化血液的异质成分可能潜在地启动和/或调节广谱的生物学程序[4]。

[4] Bocci V., 2002. Oxygen–ozone Therapy. A Critical Evaluation. Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, The NT.

[89] [Madden, M.C., Friedmen M., Hanley N., Siegler E.,Quay J.,Becker S., Devlin R.,and Koren H,1993,Chemical nature and immunotoxicological properties of arachidonic and degradation products formed by exposure to ozone, Environ. Health Perspect. 101:154-164.    

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[93] Parola, M., Bellomo G, Robino G., Barrera G., and Dianzani M. U., 1999, 4-Hydroxynonenal as a biological signal:molecular basis and pathophysiological implications, Antiox. Redox Signal. 1:255- 284. 

现今可获得的文献表明，脂质过氧化物分解产生的4-HNE、4-羟基己烯醛和丙二醛，具有细胞毒性、基因毒性以及其他的有害作用。研究表明，在体内，低于LD50 1000倍浓度（0. 05 - 0. 5Amo1/L）的醛，具有生理上和也可能是药理上的意义[94,95]。这归因于不同细胞内存在丰富的酶，包括醛脱氢酶、醇脱氢酶、醛糖还原酶和还原型谷胱甘肽肤转移酶[94,96,97]。这些有毒产物在肝脏中进行解毒，并且在肾脏中被排泄，未在患者中观察到醛的急性或慢性毒性[4]。

[4] Bocci V., 2002. Oxygen–ozone Therapy. A Critical Evaluation. Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, The NT.

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详细信息：三氧大自血疗法——采血、混合、回输篇

三氧大自血疗法对内皮细胞等影响

三氧作用的中心常常是血浆，臭氧溶解并释放有效分子作用于红细胞（ER）、血液单核细胞、粒细胞（GRAN），血小板（PLAT）和内皮细胞。

血浆和细胞外液是三氧产生的复合物、细胞释放分子（细胞因子、生长因子、内泌素血小板激活因子、代谢产物等）和大量的靶细胞相互作用的介质。

因此，三氧治疗的刺激不仅可以同时激发很多机能活动，由此可以引起大量不同的治疗反应，而且促进一个可估测的、短暂的氧化应激。

与内源性的氧化应激相同吗？

它与内源性的氧化应激不同，有一个治疗性的“休克”。可以诱导抗氧化系统的上调反应远远超过慢性氧化应激的简单调节。[4]

生物自然氧化疗法

适量的三氧和过氧化氢等氧化剂能诱导抗氧化酶的过度表达从而清除生理和病理过程中形成的自由基，同时还增加机体的氧供，这是生物氧化疗法的基础[98,99]。生物氧化疗法又称生物自然氧化疗法，是顺势疗法一种。

[98] Larini A.Bianehi I.Bocci V The ozone tolerance:enhancement of antioxidant enzynles is Ozone dose—dependent in jurkat cells.Free Radic Res, 2003, 37:1163-1168.

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三氧对人类血管内皮细胞的影响

在三氧化血液回输期间，在体内LOPs接触内皮细胞后很快消失，V.Bocci等[100]研究40ug/ml和80ug/ml浓度三氧对人类血管内皮细胞的影响，培养显示人类血管内皮细胞生成的NO+随三氧剂量的增加而明显增加，具有明显依赖性；加入L-精氨酸（20uM），诱导NO合成酶，NO+合成明显增加，加入N-硝基-L-精氨酸甲酯（20uM）或L-N-ω-氮-L-精氨酸甲酯，NO+合成则被抑制。

[100]  Valacchi G, Bocci V. Studies on the biological effects of ozone: 11.Release of factors from human endothelial cells. Mediat Inflamm 2000;9: 271-276

生理条件下，内皮细胞只产生微量的NO•（1-10 uM）和超氧阴离子（1nM，一种血管收缩因子），很快被红细胞清除[101]；血管内的NO•半衰期约为2毫秒，具有舒张血管平滑肌作用（特别是四肢）。

NO•与GSH、半胱氨酸、白蛋白、血红蛋白生成谷胱甘肽硝酸基硫醇或半胱氨酸亚硝荃硫酸或S-亚硝胺白蛋白不同产物，这些NO•供体药物，有缓慢释放NO作用，半衰期可达5-50分钟[102,103]。三氧化血液具有提高PGI2（前列环素）和血管生成素作用，改善血管舒张作用[35]。

[35] Bocci V. Ozone as Janus: this controversial gas can be either toxic or medically useful. Mediators Inflamm. 2004 Feb;13(1):3-11. Review. 

[101]  Wink DA, Grisham MB, Mitchell JB, Ford PC. Direct and indirect effects of nitric oxide in chemical reactions relevant to biology. Methods Enzymol 1996; 268: 12-31.

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